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一种测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn-2位脂肪酸组成的方法技术

时间:2018-12-08 19:59  来源:未知  阅读次数: 复制分享 我要评论

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  一种测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn-2位脂肪酸构成的方式手艺

  手艺编号:14016149

  阅读:55

  更新日期:2016-11-18 01:26

  本发现专利手艺公开了一种测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn‑2位脂肪酸构成的方式,其包罗,操纵脂肪酶Lipozyme 435连系超声辅助醇解富含多不饱和脂肪酸甘三酯;将获得的超声辅助酶法醇解产品经高效液相进行分手,获得sn‑2单甘油酯并收集;将所得的sn‑2单甘油酯进行甲酯化衍生处置,获取衍生物;气相色谱检测所得的衍出产物,测定甘油三酯中sn‑2位脂肪酸的构成及含量。本发现专利手艺供给的富含多不饱和脂肪酸甘三酯超声辅助醇解反映及sn‑2单甘酯分手和甘三酯sn‑2位脂肪酸构成的测定方式,精确度和活络度高、重现性好、不变性强。

  【手艺实现步调摘要】

  本专利手艺涉及检测

  ,特别指一种操纵南极假丝酵母源脂肪酶连系超声辅助醇解甘三酯,颠末高效液相色谱分手提取、衍生化后操纵气相色谱检测富含多不饱和脂肪酸的油脂甘三酯中sn-2位脂肪酸的方式。

  多不饱和脂肪酸(PUFA)指含有两个或两个以上双键且碳链长度为18~22个碳原子的直链脂肪酸。凡是分为omega-3和omega-6,在多不饱合脂肪酸分子中,距羧基最远端的双键在倒数第3个碳原子上的称为omega-3;在第六个碳原子上的,则称为omega-6。多不饱和脂肪酸在人体中具有很多特殊的心理功能。此中,DHA和ARA是人体大脑和视神经发育的主要物质,特别是对提高孕期和婴儿期智力和目力具有主要感化,因而,遍及添加于婴幼儿配方中。此外,EPA和DHA对防治心血管疾病、糖尿病和肿瘤等方面也阐扬着积极的功能。目前,深海鱼油、微藻油和微生物油脂是Omega-3和Omega-6系列多不饱和脂肪酸的次要来历。富含多不饱和脂肪酸的油脂中甘三酯是其次要成分,其含量占总脂类的90%以上。甘油三酯是由一分子甘油和三分子脂肪酸通过酯化反映缩合而成的,酰基可位于sn-2和sn-1,3,其化学布局式如下:因为多不饱和脂肪酸来历、脂肪酸品种和含量,碳链长短、双键数目、双键位置的分歧而具有分歧的理化和流变性质,特别是多不饱和脂肪酸在甘油三酯中位置分布影响其消化,接收,代谢及养分价值。富含多不饱和脂肪酸甘三酯的油脂进入人体内,经胰脂酶部门水解生成sn-1,3游离脂肪酸和sn-2单甘酯,与胆盐构成乳糜微粒而被小肠粘膜接收。然而,两者的代谢路子分歧,游离多不饱和脂肪酸一部门被运往肝脏进行β-氧化为机体供给能量,而另一部门游离的长链脂肪酸易与Ca2+和Mg2+构成钙镁皂,惹起便秘,同时形成钙质流失,不克不及阐扬其应有的心理功能;而sn-2单甘酯则从头酯化,通过淋巴转运输送至脑部和眼部能够充实阐扬其心理功能。因而,精确测定多不饱和脂肪酸在甘三酯中的位置分布是评价其养分价值的主要目标。目前,常用的测定甘三酯中脂肪酸位置分布的方式有胰脂酶水解法和烯丙基溴化镁降解法。胰脂酶水解法是按照胰脂酶的sn-1,3特同性,通过水解甘三酯sn-1,3位上的脂肪酸,对sn-2-单甘酯进行测定,阐发脂肪酸的位置分布的一种常用的酶解方式。然而,研究表白胰脂酶无法无效地水解长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA),具有局限性。另一种方式是烯丙基溴化镁降解法,根据格氏降解反映将甘三酯sn-1or 3位酯化脂肪酸降解,对生成的sn-1,2or sn-2,3甘二酯进行测定,从而计较出脂肪酸位置分布的一种化学方式。此方式能够避免胰脂酶对脂肪酸的选择性水解,可是,烯丙基溴化镁遇水极易失活,且具有毒性。因而,摸索其他适合测定富含LC-PUFA甘三酯的脂肪酸位置分布的方式对有主要的意义。

  手艺实现思绪

  本部门的目标在于概述本专利手艺的实施例的一些方面以及简要引见一些较佳实施体例。在本部门以及本申请的仿单摘要和专利手艺名称中可能会做些简化或者省略以避免本部门、仿单摘要和专利手艺名称的目标恍惚,而这种简化或省略不克不及用于限制本专利手艺的范畴。鉴于现有测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn-2位脂肪酸构成的方式、制备方式和使用中具有的问题,提出了本专利手艺。因而,本专利手艺的目标是供给了一种无效测定富含多不饱和脂肪酸油脂的甘三酯中sn-2位脂肪酸构成的方式。为处理上述手艺问题,本专利手艺供给了如下的手艺方案:一种测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn-2位脂肪酸构成的方式,其包罗,操纵脂肪酶Lipozyme 435连系超声辅助醇解富含多不饱和脂肪酸甘三酯;将获得的超声辅助酶法醇解产品经高效液相进行分手,获得sn-2单甘油酯并收集;将所得的sn-2单甘油酯进行甲酯化衍生处置,获取衍生物;气相色谱检测所得的衍出产物,测定甘油三酯中sn-2位脂肪酸的构成及含量。作为本专利手艺所述一种测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn-2位脂肪酸构成的方式的优选方案,此中:所述脂肪酶Lipozyme 435为操纵南极假丝酵母发酵产的sn-1,3特同性脂肪酶。作为本专利手艺所述一种测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn-2位脂肪酸构成的方式的优选方案,此中:所述超声辅助醇解中,超声波功率为200~400W。作为本专利手艺所述一种测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn-2位脂肪酸构成的方式的优选方案,此中:所述高效液相进行分手,其前提为:硅胶柱,柱温:25~45℃;流动相:A柱正己烷:异丙醇=99:1;B柱异丙醇:正己烷:乙酸=1:1:0.2;流速0.5~1.5mL/min;进样量50μL。作为本专利手艺所述一种测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn-2位脂肪酸构成的方式的优选方案,此中:在操纵脂肪酶Lipozyme 435连系超声辅助醇解富含多不饱和脂肪酸甘三酯之后,将获得的超声辅助酶法醇解产品经高效液相进行分手,获得sn-2单甘油酯并收集之前,还包罗,先辈油酸sn-2单甘油酯标样,记下sn-2单甘油酯的保留时间,作为鉴定单甘油酯的保留时间以进行高效液相分手。作为本专利手艺所述一种测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn-2位脂肪酸构成的方式的优选方案,此中:所述将所得的sn-2单甘油酯进行甲酯化衍生处置,获取衍生物是将sn-2-甘一酯甲酯化利用氮吹仪将溶剂挥发掉,并向离心管中插手体积比为2:1的正己烷和1.5mol/L的氢氧化钠-甲醇溶液,将夹杂液混匀1min,5000r/min离心3min,收集上清液获得衍生物。作为本专利手艺所述一种测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn-2位脂肪酸构成的方式的优选方案,此中:所述气相色谱检测所得的衍出产物,其前提为:初始温度80~100℃,连结2-5min,以(5~15)℃/min升至160~200℃,连结2~5min,再以(5~15)℃/min升温至210~230℃;载气为纯度≥99.99%的氮气;载气流速为1.0mL/min;分流比100~50∶1;气化室温度250~300℃;进样体积1.0μL。作为本专利手艺所述一种测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn-2位脂肪酸构成的方式的优选方案,此中:所述测定甘油三酯中sn-2位脂肪酸的构成及含量,其通过脂肪酸甲酯混标的保留时间来判定脂肪酸品种,相对含量暗示为mol%。本专利手艺起首操纵南极假丝酵母源脂肪酶(Lipozyme 435)连系超声辅助的醇解反映富含多不饱和脂肪酸甘三酯,该酶在醇解反映中具有很强的sn-1,3特同性,合用于富含多不饱和脂肪酸甘三酯的sn-1,3特同性酶促醇解反映,同时连系超声波辅助提高了醇解反映速度。因而,本专利手艺供给的富含多不饱和脂肪酸甘三酯超声辅助醇解反映及sn-2单甘酯分手和甘三酯sn-2位脂肪酸构成的测定方式,精确度和活络度高、重现性好、不变性强。附图申明为了更清晰地申明本专利手艺实施例的手艺方案,下面将对实施例描述中所需要利用的附图作简单地引见,显而易见识,下面描述中的附图仅仅是本专利手艺的一些实施例,对于本范畴通俗手艺人员来讲,在不付出缔造性劳动性的前提下,还能够按照这些附图获得其它的附图。此中:图1为采用本专利手艺测定方式获得的脂肪酸乙酯标品气相图谱图。具体实施体例为使本专利手艺的上述目标、特征和长处可以或许愈加较着易懂,下面通过本专利手艺的具体实施体例做细致的申明。鄙人面的描述中阐述了良多具体细节以便于充实理解本专利手艺

  【手艺庇护点】

  一种测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn‑2位脂肪酸构成的方式,其特征在于:包罗,操纵脂肪酶Lipozyme 435连系超声辅助醇解富含多不饱和脂肪酸甘三酯;将获得的超声辅助酶法醇解产品经高效液相进行分手,获得sn‑2单甘油酯并收集;将所得的sn‑2单甘油酯进行甲酯化衍生处置,获取衍生物;气相色谱检测所得的衍出产物,测定甘油三酯中sn‑2位脂肪酸的构成及含量。

  【手艺特征摘要】

  1.一种测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn-2位脂肪酸构成的方式,其特征在于:包罗,操纵脂肪酶Lipozyme 435连系超声辅助醇解富含多不饱和脂肪酸甘三酯;将获得的超声辅助酶法醇解产品经高效液相进行分手,获得sn-2单甘油酯并收集;将所得的sn-2单甘油酯进行甲酯化衍生处置,获取衍生物;气相色谱检测所得的衍出产物,测定甘油三酯中sn-2位脂肪酸的构成及含量。2.按照权力要求1所述的测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn-2位脂肪酸构成的方式,其特征在于:所述脂肪酶Lipozyme 435为操纵南极假丝酵母发酵产的sn-1,3特同性脂肪酶。3.按照权力要求1所述的测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn-2位脂肪酸构成的方式,其特征在于:所述超声辅助醇解中,超声波功率为200~400W。4.按照权力要求1~3任一所述的测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn-2位脂肪酸构成的方式,其特征在于:所述高效液相进行分手,其前提为:硅胶柱,柱温:25~45℃;流动相:A柱正己烷:异丙醇=99:1;B柱异丙醇:正己烷:乙酸=1:1:0.2;流速0.5~1.5mL/min;进样量50μL。5.按照权力要求4所述的测定多不饱和脂肪酸甘三酯中sn-2位脂肪酸构成的方式,其特征在于:在操纵脂肪酶Lipozyme 435连系超声辅助醇解富含多不饱和脂肪酸甘三酯之后,将获得的超声辅助酶法醇解产品经高效...

  【专利手艺属性】

  手艺研发人员:王兴国张惠君金青哲刘睿杰常明黄健花,

  申请(专利权)人:江南大学,

  国别省市:江苏;32

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